PHÂN TÍCH CHỈ TIÊU COLIFORM, E.COLI TRONG NƯỚC UỐNG
PHÂN TÍCH CHỈ TIÊU COLIFORM, E.COLI TRONG NƯỚC UỐNG
Phân tích chỉ tiêu coliform, e.coli trong nước uống
QCVN 6-1: 2010/BYT Quy chuẩn kỹ thuật quốc gia đối với nước khoáng thiên nhiên và nước uống đóng chai.
I. VI KHUẨN COLIFORM, E.COLI
(Phân tích chỉ tiêu coliform) Vi khuẩn Coliform đóng vai trò quan trọng trong việc phát hiện nhiễm khuẩn của nguồn nước. Chỉ số Coliform trong nước hỗ trợ đánh giá mức độ sạch khuẩn và sạch của nước. Sự xuất hiện của chúng trong nước uống cho thấy các sinh vật gây bệnh, mầm bệnh có thể đang hoạt động trong hệ thống nước.
1. Vi khuẩn Coliform, E.Coli là gì?
- Vi khuẩn Coliform: thuộc họ Enterobacteriaceae sinh enzyme β-D-galactosidase, là vi khuẩn Gram âm, hình que, không sinh bào tử, lên men lactose sinh khí và tạo axit trong 24 – 48h ở 35 °C. Đây là nhóm vi khuẩn phổ biến và sống được trong nhiều môi trường khác nhau như đất, nước (nước uống, nước sinh hoạt và nước nuôi trồng thủy sản), thức ăn và trong phân động vật.
- Vi khuẩn E.Coli: thuộc họ Enterobacteriaceae sinh enzyme β-D-galactosidase và β-D-glucuronidase, là vi khuẩn đại tràng, chủ yếu ký sinh trong đường ruột của người và động vật máu nóng.
2. Tác hại của vi khuẩn Coliform, E.Coli trong nước như thế nào?
- Vi khuẩn Coliform tổng thường được tìm thấy trong môi trường tự nhiên và nhìn chung chúng vô hại. Nếu chỉ phát hiện tổng số vi khuẩn Coliform trong nước uống, nguyên nhân có thể là do môi trường, vì thế có thể đã tồn tại một con đường để mầm bệnh xâm nhập vào hệ thống.
- Coli xuất hiện trong nước cho thấy nước đã nhiễm, có khả năng cao xuất hiện mầm bệnh, nguy cơ gây hại đến sức khỏe cho bất cứ ai hấp thụ nguồn nước đó. Ngoài ra, một số chủng vi khuẩn E.coli có thể gây tiêu chảy, thậm chí rối loạn máu, suy thận dẫn đến tử vong.
II. HƯỚNG DẪN PHÁT HIỆN VÀ ĐẾM COLIFORM, E.COLI TRONG NƯỚC UỐNG
Kiểm nghiệm vi sinh là gì?
Là phân tích, phát hiện, định lượng vi sinh vật trên mẫu nhằm xác định mật độ vi sinh vật, có hay không có vi sinh vật trong mẫu.
1. Phương pháp phân tích Coliform, E.Coli trong nước uống
- Hướng dẫn phát hiện và đếm Coliform, E.Coli trong nước theo TCVN 6187-1:2019 bẳng phương pháp màng lọc áp dụng cho nước có số lượng vi khuẩn thấp. (Phân tích chỉ tiêu coliform)
2. Lấy và bảo quản mẫu
- Lấy mẫu vào các chai polyetylen đã rửa sạch và khử trùng bằng nồi hấp ở 1210C trong 15 phút.
- Việc phân tích nên tiến hành càng sớm càng tốt, nếu chưa thể kiểm tra thì mẫu phải được bảo quản ở 50C ±30C đến 24h trước khi kiểm tra.
3. Thiết bị, dụng cụ
- Tủ sấy hơi nóng để khử trùng khô
- Nồi hấp tiệt trùng 1210C ± 30C
- Tủ ấm được điều chỉnh ở nhiệt độ 360C ± 20C
- Thiết bị lọc màng
- Màng lọc khử khuẩn 0,45 mm
- Đĩa petri
- Que cấy tròn
- Pippet 1ml, 10ml
- Đèn cồn
- Chai thủy tinh 100ml, 250ml
- Kẹp vô khuẩn
4. Môi trường và hoá chất
- Môi trường CHROMOGENIC COLIFORM Agar (CCA): Hòa tan 30 g môi trường CHROMOGENIC COLIFORM Agar trong 1000ml nước cất, đem đun nóng cho đến khi môi trường tan hoàn toàn, phân phối khoảng 10-15ml môi trường vào đĩa petri, để môi trường đông lại.
- Môi trường Trypic soya agar (TSA): Hòa tan 40 g môi trường Trypic soya agar trong 1000 ml nước cất, đem đun nóng cho đến khi môi trường tan hoàn toàn, hấp khử trùng bằng nồi hấp áp lực 1210C trong 15 phút.
- Đĩa oxidase thương mại.
5. Kiểm soát chất lượng
- Chủng chứng dương: E.coli ATCC 25922, nồng độ sử dụng < 102 tế bào.
- Mẫu trắng: sử dụng dung dịch BPW.
- Chủng chứng âm: E. faecalis NCTC 775, nồng độ sử dụng > 103 tế bào.
6. Quy trình phân tích
a. Mẫu thử nghiệm
Xử lí mẫu
- Lọc mẫu: dùng kẹp vô trùng lắp đặt màng lọc vi khuẩn lên đĩa đệm có giá đỡ của thiết bị lọc. Lắp lại phễu lọc vô khuẩn sao cho đặt khít trên màng lọc, vặn chốt vừa chặt để tránh nước rỉ ra ngoài.
- Đối với nước uống đóng chai thể tích là 250 ml, nước ăn uống thể tích là 100 ml.
Nuôi cấy trên môi trường phân lập
- Dùng kẹp vô trùng đặt màng lọc lên môi trường CCA.
- Ủ các đĩa ở 360C ± 20C trong 21h ±
- Đếm các khuẩn lạc dương tính β-D-galactosidase (màu hồng đến đỏ) được xem là vi khuẩn Coliform giả định, nhưng không phải E.Coli.
- Đếm các khuẩn lạc dương tính β-D-galactosidase và β-D-glucuronidase (màu xanh đen đến màu tím) là E.Coli.
- Để khẳng định vi khuẩn Coliform giả định, nhưng không phải E.Coli xử dụng phép thử oxidase.
- Phép thử oxidase: Dùng vòng cấy platin (không có Ni crom), vòng nhựa, que hoặc que thủy tinh, bôi dàn tất cả hoặc ít nhất 10 khuẩn lạc trên màng lọc lên trên giấy thử oxidase đã được làm ướt. Quan sát nếu xuất hiện của màu xanh đậm trong khoảng 30 s là phản ứng dương tính.
- Có thể cấy truyền các khuẩn lạc sang môi trường TSA để làm thuần rõ ràng vi khuẩn để thực hiện phép thử oxidase.
b. Thực hiện mẫu kiểm soát
Mẫu môi trường
- Ủ các đĩa môi trường CCA, TSA, dung dịch pha loãng ở nhiệt độ và thời gian như ủ mẫu thử nghiệm.
- Kết quả phân tích mẫu môi trường được ghi nhận vào biểu mẫu theo dõi tương tự như phân tích mẫu.
- Mẫu môi trường đạt yêu cầu khi không có sự xuất hiện biểu hiện đặc trưng cho chỉ tiêu phân tích trong môi trường sau khi nuôi ủ.
- Nếu kết quả của mẫu môi trường bị nhiễm, thì phải kiểm tra môi trường và tiến hành phân tích lại
Mẫu trắng phòng thí nghiệm
- Tiến hành phân tích mẫu trắng định kì 1 lần trong 1 lô mẫu (>10 mẫu).
- Mẫu được xử lí và phân tích tương tự như phần mẫu thử nghiệm 8.1.
- Kết quả phân tích mẫu trắng được ghi nhận vào biểu mẫu theo dõi tương tự như phân tích mẫu.
Mẫu QC
- Tiến hành phân tích mẫu QC trong mỗi lần phân tích.
- Thêm 1ml chủng E.Coli (khoảng 80-100 CFU/ml) vào mẫu blank đã biết trước mật độ vi sinh vật. Thực hiện phân tích mẫu QC tương tự như phần mẫu thử nghiệm 8.1
- Tính hiệu suất thu hồi
Mẫu lặp
- Khi tiến hành phân tích mẫu, cứ 10 mẫu, chọn 1 mẫu đo lặp lại ít nhất hai lần.
Mẫu thêm chuẩn
- Tiến hành phân tích mẫu thêm chuẩn trong mỗi lần phân tích.
- Thêm 1ml chủng E.Coli (khoảng 80-100 CFU/ml) vào mẫu đã biết trước mật độ vi sinh vật. Thực hiện phân tích mẫu thêm chuẩn tương tự như phần mẫu thử nghiệm 8.1.
- Tính hiệu suất thu hồi
c. Tính toán kết quả
- Tổng số vi khuẩn Coliform là tổng của các khuẩn lạc âm tính oxidase có màu hồng đến màu đỏ và tất cả các khuẩn lạc có màu xanh đậm đến màu tím.
- Tổng số vi khuẩn E.Coli là các khuẩn lạc có màu xanh đậm đến màu tím
Công ty TNHH Thương Mại Dịch Vụ Tư vấn Môi Trường Tân Huy Hoàng
Tự hào là Đơn vị tiên phong về chất lượng, uy tín hàng đầu và giá rẻ nhất hiện nay. Với kinh nghiệm lâu năm trong ngành. Tân Huy Hoàng cam kết cung cấp cho Quý Khách hàng các sản phẩm phù hợp nhất, chất lượng cao nhất. Phù hợp với đặc điểm từng ngành nghề sản xuất với giá thành cạnh tranh, hiệu quả và tiết kiệm chi phí nhất. Chúng tôi có đội ngũ chăm sóc khách hàng chu đáo. Đội ngũ kỹ thuật tư vấn có chuyên môn với từng ngành nghề sản xuất. Và đội ngũ giao hàng nhanh chóng sẽ luôn mang đến sự hài lòng cho Quý Khách hàng. Để được sự tư vấn hoàn toàn miễn phí. Quý khách hàng xin vui lòng liên hệ 0902.695.765 – 0898.946.896 (Ms. HẢI YẾN).
————————————-
Dịch vụ trọn gói – Giá cả cạnh tranh – Chất lượng vượt trội
Còn chần chờ gì nữa mà không liên hệ với chúng tôi. Để nhận được sự tư vấn nhiệt tình về các vấn đề môi trường. Cùng mức giá cạnh tranh nhất thị trường miền Nam?
Liên hệ ngay:
Hotline: 0902 695 765 – 0898 946 896 (Ms.Yến)
Fanpage: Tư Vấn Môi Trường Tân Huy Hoàng
Tham khảo thêm các dịch vụ khác tại đây
CÔNG TY TNHH TMDV TƯ VẤN MÔI TRƯỜNG TÂN HUY HOÀNG
Địa chỉ: B24, Cx Thủy Lợi 301, Nguyễn Văn Thương, P.25, Q.Bình Thạnh, Tp.HCM.
CN1: 10/46 Lê Quí Đôn, KP4, P. Tân Hiệp, Tp. Biên Hòa, Đồng Nai.
CN2: Lê Hồng Phong, Tân Đông Hiệp, Dĩ An, Bình Dương.