PHÂN TÍCH CHỈ TIÊU STAPHYLOCOCCUS AUREUS TRONG NƯỚC SẠCH

Phân tích chỉ tiêu staphylococcus aureus trong nước sạch

Staphylococcus aureus (tụ cầu vàng) là một trong những loại vi khuẩn tụ cầu gây nhiều bệnh nhiễm khuẩn cho cộng đồng cũng như trong bệnh viện, trong đó có một số bệnh rất nặng và có thể dẫn đến tử vong nếu không được phát hiện sớm và điều trị kịp thời.

Loại vi khuẩn này kháng rất nhiều loại kháng sinh thông dụng, đặc biệt là kháng sinh methicillin, do đó phòng tránh bệnh nhiễm khuẩn do vi khuẩn tụ cầu vàng là việc hết sức quan trọng.

1. Vi khuẩn Staphylococcus aureus (tụ cầu vàng) – PHÂN TÍCH CHỈ TIÊU

Staphylococcus là nhóm các cầu khuẩn kị khí tùy ý, gram dương, không di động, không sinh nha bào, thường đứng lẻ, từng đôi hoặc tập hợp thành đám nhỏ.

Staphylococcus aureus được xếp vào nhóm vi khuẩn cơ hội, có mặt rộng rãi và thường xuyên trong mô chờ đợi điều kiện thuận lợi để xâm nhập và gây nên tình trạng nhiễm trùng nghiêm trọng, gây nguy hiểm cho tính mạng người bệnh.

Khi cơ thể bị nhiễm các loại vi khuẩn S.aureus, người bệnh sẽ gặp phải những tình trạng phổ biến như: nhiễm khuẩn da, nhiễm khuẩn huyết, ngộ độc thức ăn và viêm ruột cấp, nhiễm khuẩn bệnh viện, hội chứng sốc nhiễm độc,…

2. Hướng dẫn phát hiện và đếm Staphylococcus aureus trong nước sạch

Lấy và bảo quản mẫu

Lấy mẫu vào các chai polyetylen đã rửa sạch và khử trùng bằng nồi hấp ở 121⁰C trong 15 phút.

Việc phân tích nên tiến hành càng sớm càng tốt, phải tiến hành trong vòng 6 h kể từ khi lấy mẫu. Trong một số trường hợp ngoại lệ, có thể cho phép giữ mẫu tới 24 h trước khi kiểm tra nếu mẫu được bảo quản ở 50C ± 3⁰C.

Thiết bị, dụng cụ

• Tủ sấy hơi nóng để sấy khô: 011-TS/TBHH-PT
• Nồi hấp tiệt trùng 121⁰C: 044-NH/TBHH-PT, 026-NH/TBHH-PT
• Tủ ấm được điều chỉnh ở nhiệt độ 35 ± 0,5⁰C: 064-TA/TBHH-PT
• Bể điều nhiệt: 062-WB/TBHH-PT
• Thiết bị lọc màng: 034-BHCK/TBHH-PT
• Ống nghiệm
• Màng lọc khử khuẩn 0,22 mm
• Đĩa petri
• Que cấy tròn
• Pippet 1ml, 10ml
• Đèn cồn
• Chai thủy tinh 100ml
• Kẹp vô khuẩn.

Môi trường và hóa chất

• Môi trường Baird Parker Agar : hòa tan 63g môi trường Baird Parker Agar (V34) trong 950ml nước cất, đem đun nóng cho đến khi môi trường tan hoàn toàn, hấp khử trùng bằng nồi hấp áp lực 121⁰C trong 15 phút.

Để môi trường nguội ở 50⁰C thì thêm 50ml Egg Yolk Tellurite. Phân phối khoảng 10-15ml môi trường vào đĩa petri. Chuẩn bị trước khi thí nghiệm hoặc bảo quản lạnh ở nhiệt độ 2-8⁰C sử dụng trong 1 tháng.

• Huyết tương thỏ: Sử dụng môi trường đông khô có thành phần tương ứng.
• BHI broth: Sử dụng môi trường đông khô có thành phần tương ứng.
• TSA agar: Sử dụng môi trường đông khô có thành phần tương ứng.
• Dung dịch sulfamezathin.

Kiểm soát chất lượng

• Chủng chứng dương: aureus ATCC 6538, nồng độ sử dụng < 10² tế bào.
• Mẫu trắng: sử dụng dung dịch BPW.
• Chủng chứng âm: coli ATCC 25922, nồng độ sử dụng > 10³ tế bào.
• Phiếu báo cáo kết quả thử nghiệm: BM01VS-QT20-BCTN-06.

Quy trình phân tích

Mẫu thử nghiệm

Xử lí mẫu: Lọc mẫu: dùng kẹp vô trùng lắp đặt màng lọc vi khuẩn lên đĩa đệm có giá đỡ của thiết bị lọc. Lắp lại phễu lọc vô khuẩn sao cho đặt khít trên màng lọc, vặn chốt vừa chặt để tránh nước rỉ ra ngoài. Rót 100ml lít mẫu vào lọc.

Nuôi cấy trên môi trường phân lập:

• Dùng kẹp vô trùng đặt màng lọc lên môi trường Baird Parker Agar.

• Ủ các đĩa ở 35⁰C ± 0,5⁰C trong 44 h ± 4 h.
• Khuẩn lạc điển hình có màu đen nhánh, bóng, lồi, quanh khuẩn lạc có vòng sáng rộng 2-5 mm.
• Khẳng định: bằng phép thử catalase và coagulase.
• Chọn 5 khuẩn lạc điển hình và 5 khuẩn lạc không điển hình ở mỗi đĩa cấy vào môi trường BHI ủ ở 37⁰C trong 24 ± 2h.
• Các khuẩn lạc staphylococi có phản ứng dương tính catalase.
• Bằng kỹ thuật vô trùng chuyển 0.1 mL dịch cấy cho vào 0.3mL huyết tương thỏ (trừ khi nhà sản xuất có quy định lượng khác) và ủ ở 35⁰C trong 24h.
• Nghiêng ống, kiểm tra sự ngưng kết của huyết tương sau khi ủ từ 4h-6h và nếu phép thử là âm tính kiểm tra lại sau khi ủ 24h.
• Nếu thể tích kết dính chiếm hơn một nửa thể tích ban ban đầu của chất lỏng thì phép thử coagulase là dương tính.
• Để kiểm tra âm tính, đối với mỗi mẻ huyết tương, thêm 0.1 mL dịch canh thang BHI vô trùng vào một lượng huyết tương thỏ đã khuyến cáo và ủ như trên nhưng không cấy. Phép thử hợp lệ khi kiểm tra cho thấy huyết tương không có dấu hiệu gắn kết.

Thực hiện mẫu kiểm soát

Mẫu môi trường

• Ủ các đĩa môi trường BP, BHI, TSA, dung dịch pha loãng ở nhiệt độ và thời gian tương tự như ủ mẫu thử nghiệm.
• Kết quả phân tích mẫu môi trường được ghi nhận vào biểu mẫu theo dõi tương tự như phân tích mẫu.
• Mẫu môi trường đạt yêu cầu khi không có sự xuất hiện biểu hiện đặc trưng cho chỉ tiêu phân tích trong môi trường sau khi nuôi ủ.
• Nếu kết quả của mẫu môi trường bị nhiễm, thì phải kiểm tra môi trường và tiến hành phân tích lại.

Mẫu QC

• Tiến hành phân tích mẫu QC trong mỗi lần phân tích.
• Thêm 1ml Staphylococcus aureus (<100CFU/ml) vào mẫu blank đã biết trước mật độ vi sinh vật. Thực hiện phân tích mẫu QC tương tự như phần mẫu môi trường.
• Tính hiệu suất thu hồi.

Mẫu lặp

• Khi tiến hành phân tích mẫu, cứ 10 mẫu, chọn 1 mẫu đo lặp lại ít nhất hai lần.

 Mẫu thêm chuẩn

• Tiến hành phân tích mẫu thêm chuẩn trong mỗi lần phân tích.
• Thêm 1ml chủng Staphylococcus aureus (<100CFU/ml) vào mẫu đã biết trước mật độ vi sinh vật. Thực hiện phân tích mẫu thêm chuẩn tương tự như phần mẫu thử nghiệm 8.1.
• Tính hiệu suất thu hồi.

Báo cáo kết quả

• Tổng số khuẩn lạc Staphylococcus aureus là tổng các khuẩn lạc màu đen trên môi trường Baird Parker Agar cho phản ứng dương tính catalase và làm ngưng kết huyết tương.
• Nếu không phát hiện khuẩn lạc nào trong phần mẫu thử được lọc, kết quả được báo cáo là: “<1 CFU/thể tích mẫu thử”.

Công ty TNHH Thương Mại Dịch Vụ Tư vấn Môi Trường Tân Huy Hoàng 

Tự hào là Đơn vị tiên phong về chất lượng, uy tín hàng đầu và giá rẻ nhất hiện nay. Với kinh nghiệm lâu năm trong ngành. Tân Huy Hoàng cam kết cung cấp cho Quý Khách hàng các sản phẩm phù hợp nhất, chất lượng cao nhất.  Phù hợp với đặc điểm từng ngành nghề sản xuất với giá thành cạnh tranh, hiệu quả và tiết kiệm chi phí nhất. Chúng tôi có đội ngũ chăm sóc khách hàng chu đáo. Đội ngũ kỹ thuật tư vấn có chuyên môn với từng ngành nghề sản xuất. Và đội ngũ giao hàng nhanh chóng sẽ luôn mang đến sự hài lòng cho Quý Khách hàng. Để được sự tư vấn hoàn toàn miễn phí. Quý khách hàng xin vui lòng liên hệ  0902.695.765 – 0898.946.896 (Ms. HẢI YẾN).

————————————-

Dịch vụ trọn gói – Giá cả cạnh tranh – Chất lượng vượt trội

Còn chần chờ gì nữa mà không liên hệ với chúng tôi. Để nhận  được sự tư vấn nhiệt tình về các vấn đề môi trường. Cùng mức giá cạnh tranh nhất thị trường miền Nam?

Liên hệ ngay:

Hotline: 0902 695 765 – 0898 946 896 (Ms.Yến)

Fanpage: Tư Vấn Môi Trường Tân Huy Hoàng

Tham khảo thêm các dịch vụ khác tại đây

CÔNG TY TNHH TMDV TƯ VẤN MÔI TRƯỜNG TÂN HUY HOÀNG

Địa chỉ: B24, Cx Thủy Lợi 301, Nguyễn Văn Thương, P.25, Q.Bình Thạnh, Tp.HCM.

CN1: 10/46 Lê Quí Đôn, KP4, P. Tân Hiệp, Tp. Biên Hòa, Đồng Nai.

CN2: Lê Hồng Phong, Tân Đông Hiệp, Dĩ An, Bình Dương.